Medsocium.com

Хакимова Г.Б., Хегай Т.Р., Арипова Т.У. Институт Иммунологии АН Руз (Ташкент, Узбекистан) Несмотря на широкое изучение вируса гепатита В, эта проблема остается недостаточно изученной, особенно в плане иммуногенетической характеристики вируса. Впервые седьмой генотип вируса гепатита В был выявлен французскими учеными в 2001 году. Для подтверждения исследований был проведен полный сиквенс данного генотипа и его сравнение с другими шестью генотипами вируса гепатита В. Оказалось, что разница данного генотипа в полном геноме в сравнении с другими генотипами соответствовала 11.3 %, в то время как для определения новых генотипов достаточна разница больше 8%, что и послужило основанием назвать этот генотип как новый седьмой генотип G вируса гепатита В. Институтом Иммунологии АНРУз и Нагойской медицинской Школой (Япония) была изучена распространенность шести генотипов ВГВ. В результате было установлено, что генотипы А(19%) и D (72%) являются превалирующими генотипами в Узбекистане. А так как по данным зарубежных исследователей генотип G в большинстве случаев встречается с генотипом А, это главным образом и побудило нас к изучению генотипа G. Следовательно, целью нашего исследования явилось: изучить распространенность и геномную характеристику генотипа G вируса гепатита В. Материалом для исследования послужили сыворотки периферической крови от 120 больных с хроническими вирусными гепатитами В. Серологический метод обнаружения присутствия маркеров инфекций (HbsAg , HCV-ab) в сыворотке крови проводился с помощью метода агглютинации желатиновых частиц (Serodia Fujirebio INK., Japan). Подтверждающий серологический метод определения HBsAg “Western Blot” (NEW LAV BLOT I Ac-Ab-Ak, Sanofi Diagnostic Pasteur INK). Выявление HBeAg, anti-HBeAg, anti-HBcorAg проводилось методом ИФА (коммерческие тест-системы ELSIA-F, International Reagent corporation, Japan). Экстракция ДНК вирусного гепатита В выполнялась с использованием коммерческих тест-систем «Авиценна, Москва». ПЦР-генотипирование осуществлялось методом PCR-RFLP (Restriction fragment length polymorphism) первых 6 генотипов вирусного гепатита В (А-F). Генотипирование ВГВ провдилось иммуноферментным методом при помощи иммуносорбентных энзимов (ELISA) (HBV Genotype EIA, Institute of Immunology, CO., Ltd., Tokyo, Japan). Определение генотипа G вируса гепатита В выполнялось с помощью ПЦР (Kato et al. 2001). Метод детекции последовательности нуклеотидов ДНК вирусного гепатита В к S региону (ABI Prism Big Dye Cycle Ready Reaction kit). В результате исследования определение первых шести генотипов ВГВ А-F проводилось ИФА методом с использованием моноклональных антител к pre S2 - региону и последующее ПЦР генотипирование методом PCR-RFLP S гена вируса гепатита В с использованием праймеров MF1 и MR2 показали и подтвердили предыдущие исследования, что основными генотипами ВГВ в Узбекистане являются генотип Д и А, соответственно в 72% и 19 % всех случаев. При последующим выявлении генотипа G-ВГВ было примечательно, что все генотипы G были идентифицированы вместе с генотипом А в 42%. Это обуславливается тем, что последовательность нуклеотидов в геноме генотипа G схожа с последовательностью генома генотипа А. Для дифференцировки был использован дополнительный энзим Hinf1, который разделил геном генотипа А на 251-255 и 530-534 н.п и дополнительно 482-486 н.п у генотипа G. Учитывая такие результаты, коинфицирование генотипами А и G, возникает вопрос является ли генотип G отдельным самостоятельным генотипом или же он представляет собой отдельным дефектный вирион, который нуждается в генотипе А для своей жизнедеятельности. Близкая ассоциация между генотипами А и G обуславливается высоким соответствием нуклеотидных последовательностей в S-гене до 4 %. Это вероятно происходит по причине коинфицирования этими генотипами или их рекомбинацией. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей показал, что выявленные различия относятся к новому генотипу G вируса гепатита В. Таким образом, наши исследования показали, что генотипы А и D являются доминирующими. Генотип G представлен в Узбекистане вместе с генотипом А в 42%.