Medsocium.com

Мицура В.М., Демчило А.П., Жаворонок С.В., Красавцев Е.Л. УО «Гомельский государственный медицинский университет» Продукция иммунными клетками различных цитокинов является важным показателем функционального состояния системы иммунитета при хроническом гепатите С (ХГС). Антитела к специфическому печеночному липопротеину человека, анти-ЛПЧ, (liver specific protein) являются органоспецифическими антителами, направленными против нативных печеночных антигенов. Клиническое значение анти-ЛПЧ и связь их с косвенными маркерами иммунизации при хроническом вирусном гепатите С недостаточно изучена, коммерческие диагностические наборы для выявления анти-ЛПЧ отсутствуют. Цель исследования: изучить уровни цитокинов: интерферона гамма (ИФН-γ), интерлейкинов (ИЛ): ИЛ-1α, ИЛ-4 и анти-ЛПЧ в сыворотках крови больных ХГС. Материалы и методы. Исследовалось содержание цитокинов ИЛ-1α, ИФН-γ, ИЛ-4 в сыворотках крови 34 больных ХГС в возрасте от 18 до 62 лет (средний возраст 34,8±1,8). Диагноз у всех больных был подтвержден обнаружением антител к HCV (анти-HCV) и РНК HCV методом полимеразной цепной реакции. Изучение цитокинов проводилось с использованием иммуноферментных тест-систем фирмы «Цитокин» (Россия). Нормальными значениями уровней цитокинов в сыворотке крови считались 0–50 пг/мл. В качестве контроля использовались 10 образцов сыворотки доноров. Определение антител к ЛПЧ производилось методом ИФА с помощью разработанной нами тест-системы (Демчило А.П., Жаворонок С.В.). Результаты и их обсуждение. Из 34 больных анти-ЛПЧ выявлены у 10 больных (29,4%), у остальных 24 больных (70,6%) данные антитела не выявлялись. Методом иммуноферментного анализа проведено количественное определение цитокинов в исследуемых сыворотках крови в соответствии с инструкциями по применению тест-систем. Было выявлено, что у больных ХГС в ряде случаев регистрировались повышенные уровни цитокинов (свыше 50 пг/мл): ИЛ-4 – у 4 больных (11,8%), ИФН-γ – у 8 (23,5%), ИЛ-1α – у 19 больных (55,9%). Уровни Тх2-цитокина ИЛ-4 были повышены только у больных без анти-ЛПЧ (16,7%), в то время как остальные цитокины чаще выявлялись у лиц с анти-ЛПЧ (статистически значимо для ИФН-γ (р=0,031) и ИЛ-1α (р=0,011). Далее нами оценивалась нормальность распределения уровней цитокинов у больных ХГС с помощью теста Колмогорова-Смирнова. Во всех случаях уровни р<0,01, что свидетельствует об отсутствии нормального распределения уровней цитокинов. Поэтому для дальнейшего сравнения был использован непараметрический критерий Манна-Уитни. Проводилось изучение сывороточных уровней цитокинов у доноров и больных ХГС. У лиц с анти-ЛПЧ (n=10) медианы уровней цитокинов составили: ИЛ-4 25,18 пг/мл, ИФН-γ – 60,49 пг/мл, ИЛ-1α – 95,94 пг/мл. У лиц с отсутствием анти-ЛПЧ (n=24) данные показатели составили: ИЛ-4 – 18,17 пг/мл (р=0,88), ИФН-γ – 13,82 пг/мл (р=0,045), ИЛ-1α – 30,52 пг/мл (р=0,023). Как видно из полученных данных, у больных ХГС уровни Тх1-цитокинов (ИФН-γ и ИЛ-1α) были значимо выше в группе больных с анти-ЛПЧ, что свидетельствует о важной роли аутоиммунных нарушений у больных ХГС. Вероятно, признаки системного воспаления с повышением концентраций Тх1- цитокинов в сыворотке крови связаны с процессами разрушения гепатоцитов (иммунного цитолиза), чему способствует и появление органоспецифических антител (анти-ЛПЧ). Для выявления возможной взаимосвязи между наличием анти-ЛПЧ и основным показателем цитолиза – аланинаминотрансферазой (АЛТ) проведено сравнение уровней АЛТ в зависимости от выявления анти-ЛПЧ. У лиц с наличием анти-ЛПЧ (n=10) уровни АЛТ были повышены у 8 (80,0%), медиана АЛТ – 0,53 мккат/л. У лиц с отсутствием анти-ЛПЧ (n=24) уровни АЛТ были повышены у 22 (91,7%), медиана АЛТ – 0,83 мккат/л. При сравнении данных показателей с помощью методов непараметрической статистики значимых различий не выявлено (р=0,33 по точному критерию Фишера и р=0,07 с помощью теста Манна-Уитни). Таким образом, антитела к ЛПЧ, как маркер аутоиммунитета, выявлены у 29,4% больных ХГС, что говорит о важности аутоиммунных нарушений в патогенезе ХГС. Количество повышенных (более 50 пг/мл) уровней Тх1- цитокинов (ИФН-γ и ИЛ-1α) было больше, и их уровни были статистически значимо выше у лиц с наличием анти-ЛПЧ (р<0,05). При сравнении уровней АЛТ в зависимости от выявления анти-ЛПЧ значимых различий не выявлено (р>0,05), что говорит о необходимости комплексного подхода в определении выраженности синдрома цитолиза. Взаимосвязь повышения уровней Тх-1 цитокинов и появления антител к ЛПЧ у больных ХГС требует дальнейшего изучения. Изменение уровней провоспалительных и противовоспалительных цитокинов у больных ХГС связано, в том числе, и с аутоиммунными механизмами поражения печени и может иметь важное диагностическое и прогностическое значение. Работа выполнена при поддержке Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований, грант № Б05М-188 «Показатели цитокиновой регуляции при хроническом вирусном гепатите С и их изменения в зависимости от получаемой терапии» (научный руководитель – к.м.н. Мицура В.М.).