Medsocium.com

Харківський національний медичний університет

Механізми змін проліферативної активності лімфоцитів при вакцинальному процесі до кінця не вивчений. При вакцинації проти правця не має єдиної думки про зміни реакції бластної трансформації лімфоцитів (РБТЛ) з фітогемаглютиніном (ФГА). З літературних джерел відомо, що чим більше часу проходить з моменту вакцинації, тим дедалі зменшується число щеплених з позитивною БТЛ, що дозволяє зробити припущення про втрату несприйнятливості на імунному рівні.
Метою наших досліджень було вивчення впливу атофанового гепатиту на РБТЛ у цілісній крові білих пацюків, імунізованих правцевим анатоксином (ПА) в експерименті.
Матеріали і методи. Для визначення антитоксичного протиправцевого імунітету ми застосовували реакцію пасивної гемаглютинації зі стандартним правцевим еритроцитарним діагностикумом. З метою вивчення впливу токсичного гепатиту на активний штучний імунітет проведені експериментальні дослідження на тваринах (37 здорових білих пацюків вагою 153-200 грамів). Здорові тварини були розділені на 2 групи: 1 група (15 тварин – контроль) отримували 0,5 мл ПА; 2 група (22 тварини з атофановим гепатитом) також отримували 0.5 мл ПА. Друге щеплення анатоксином проводили через місяць після першого.
Вивчення РБТЛ з ФГА проводили на 7, 14, 28,45 та 60 день. Забирання крові робили з хвостової вени, а на 45 та 60 день – при декапитації. В тіж терміни досліджували РБТЛ без мітогену.
Проліферативну активність Т-лімфоцитів оцінювали за реакцією бластної трансформації (РБТЛ). Сироватку інкубували на протязі 72 годин із специфічними антигенами (нативний правцевий анатоксин), а також з поліклональним мітогеном – фітогемаглютиніном з включенням радіоізотопної мітки 3Н-тимідину з активністю 10 КІ/мм. Зв’язування лімфоцитами радіоактивної мітки вивчали на автоматичному лічильникові “1210 Ultra Beta” в толуольному сцинтиляторі. Реакцію оцінювали за індексом стимуляції (ІС), який обчислювали за формулою (А-В)/В*100%, де А – включення 3Н-тимідину у стимульованій, В – в контрольній групі (імп/хв).
Для моделювання токсичного ураження печінки ми використовували препарат атофан. Проводили підшкірне введення атофану в дозі 500 мг/кг ваги тварини. Експериментальні дослідження показали, що вже через 24 години після введення тваринам атофану розвивалися симптоми гострого некротичного гепатиту. Статистичну обробку отриманих результатів проводили за допомогою комп’ютерної програми Medstat, ймовірність похибки (р) в оцінці результатів дослідження визначали за таблицею Стьюдента.
Результати дослідження При аналізі отриманих даних уже на сьомий день дослідження виявлено зниження ІС в РБТЛ у 3,5 рази (в І групі показник становив 20,38±8,59%, в ІІ групі (контрольній групі) – 71,07±11,71%; Р<0,05) (таб.1).
Таблиця 1
Динаміка РБТЛ з 3Н-тимідину у тварин, з гепатитом і вакцинованих протиправцевим анатоксином (М±μ).

Дослідні групи

РБТЛ (ІС %)

7-й

14-й

28-й

45-й

60-й

Гепатит
(22)

20,38±8,59

18,75±8,32

30,46±9,81

42,15±10,53

24,27±9,14

Контроль (15)

71,07±11,71

4,46±5,33

36,84±12,45

120,17±12,7

30,99±11,94

На 14 день ІС підвищувався в дослідній групі і перевищував у 4,2 рази контрольну; на 28 день ІС складав у дослідній групі 30,46%, у контрольній – 36,84%. Після повторного введення анатоксину виявлялося підвищення ІС в дослідній групі до 42,15%±10,53%, в контрольній – у 3 рази більше. На 60 день дослідження ІС у дослідній групі складав 24,27±9,14%, в контрольній – 30,90±11,94% (P<0,05).
Динаміка титрів протиправцевих антитіл і РБТЛ показала, що вже на першому тижні виявлено збільшення ІС, однак титри гемаглютинінів у РНГА були низькими. На 14 день ІС був зниженим, в контрольній групі виявлялося незначне зростання титрів специфічних антитіл. На 28 день титри антитіл до правцю визначалися у розведенні 1:301,3±89,92, ІС складав 36,89%. Низькі титри гемаглютинінів при первинній вакцинації анатоксином можна пояснити низькою відповіддю білих пацюків на специфічний антиген, а також слабкими клітинними реакціями імунітету. Наступне введення правцевого анатоксину посилювало антигенну стимуляцію як клітинних, так і гуморальних реакцій.
В 2 групі тварин гепатит на ранніх стадіях імуногенезу гальмував виробку специфічних антитіл до правцю. Зокрема, РБТЛ на 7 день спостереження складала 20,38%, титри антитіл складав 1:64±0,47. Значне підвищення титрів антитіл виявлялося на 45 день (1:1018±11,26), тим не менш, це в декілька разів нижче, ніж у контрольній групі (Р<0,05). Таке підвищення можна пояснити повторним введенням правцевого анатоксину. На 60 день ІС лімфоцитів знижувався, титри гемаглютиніну у дослідній групі були значно нижчі, ніж у контрольній: 1:960±86,81 (Р<0,05). В органах імунної системи та печінки контрольних тварин морфологічних змін не виявлено.
Висновки Відтак, ураження печінки атофаном зумовлює гальмування імунної проліферації при введенні правцевого анатоксину. Ревакцинація стимулювала виробітку правцевих антитіл, що свідчить про посилення показників, як гуморального, так і клітинного імунітету у експериментальних тваринах.